? ? ? ?來源：生物制藥小編 ? ? ?? 近年來，PD-1/PD-L1引領的腫瘤免疫全面興起，免疫檢驗點成為競爭焦點。共抑制信號的免疫檢驗點抑制劑抗體進展相對順利，激動劑抗體則出現較多的波折。其中很重要的問題就是其激活機制復雜，Cross-linking對于其激動劑活性影響很大。典型的TNFR超家族受體與配體的結合通常依賴于配體的三聚體形式，如OX40、CD40、4-1BB、DR5/DR4、GITR等。隨著機理漸漸清理，一些相對成熟的技術平臺或將成為解決cross-linking更好激活這些靶受體的方法。簡單說可以概括為以下幾類： - 提高FcγRIIb受體的親和力，但需注意不能影響其他FcγR受體的親和力以避免影響ADCC活性等；
- 多價抗體，如Inhibrx開發的DR5四價納米抗體，INBRX-109，四價抗體相對二價抗體可以更好的使受體寡聚化，更好的激活DR5。信達生物OX40四價抗體為類似原理；
- 三聚體天然配體，如三葉草生物構建OX40L三聚體、TRAIL三聚體、4-1BBL三聚體等模擬天然配體的激活效應。羅氏則構建了FAP/4-1BBL三聚體（雙抗形式），依賴于FAP的結合激活4-1BB；
- 多聚體抗體，如Genmab開發了Hexabody（E345R突變，結合靶受體后形成六聚體IgG）和IgM Biosciences的IgM亞型抗體（五聚體）。多聚體抗體可以同時結合12個或10個靶受體，更有效激活靶受體；
- 個別單抗的激動劑活性不依賴于Cross-linking，如信達生物的OX40抗體IBI101。
? ? ? ?DR5靶點、DR4靶點 ? ? ? ?TRAIL-DR通路中，與TRAIL配體結合親和力最高的是DR5（TRAIL-R2），DR4（TRAIL-R1）相對弱。早年研發DR4抗體的基本都失敗了，近年來多開發TRAIL重組蛋白或者DR5抗體。最早有效激活DR5的是諾華/ablynx開發的四價納米抗體TAS266，即通過多價抗體更好的激活DR5。不過TAS266因肝毒性較強而終止臨床研究。 ? ? ? ?Inhibrx在TAS266基礎上研究發現，其免疫原性強且血漿中含有較強pre-existing ADA，導致過度交聯。Inhibrx認為這種ADA引起的過度交聯是引起肝毒性的主要原因，因此開發了免疫原性弱、無Pre-existing ADA的四價納米抗體INBRX-109。該藥物被奕安濟世引進國內，研發代碼為JCT-205。 ? ? ? ?IgM Biosciences和Genmab分別開發了五聚體IgM、六聚體IgG的DR5多聚體抗體，更好的激活DR5而不再依賴于FcγRIIb-dependent cross-linking。 ? ? ? ?IgM亞型是天然五聚體形式，因此為10價抗體。IgM的一項重要特征是補體CDC活性極強，另一項特征價態高可以引發受體寡聚化在TNFR超家族受體的激活中發揮重要作用。 ? ? ? ?以下是IgM亞型DR5抗體IGM-8444的作用機制。 ? ? ? ?Genmab的Hexabody在Fc引入E345R突變，該突變使得IgG在結合抗原后Fc相互作用形成六聚體。Genmab最初的設計也是為了強CDC活性，同樣的，高價態使得其在受體寡聚化中發揮重要作用。Genmab的GEN-1029還特殊在用了兩個靶向DR5不同表位的Hexabody抗體，即混合物。 
? ? ? ?三葉草生物則直接構建三聚體TRAIL配體蛋白SCB-808，這也是其核心技術。 
? ? ? ?羅氏構建FAP/DR5雙抗RG7386提高對腫瘤組織的特異性（FAP為腫瘤特異性靶標）。RG7386同時去除了FcγRIIb-dependent cross-linking以避免出現肝毒性，該雙抗更多是依賴于FAP的結合激活DR5，但看設計可能激動劑活性不高。? ? ? ? ?復宏漢霖的HLX56為DR4抗體，具有Cross-linking效應。不過為何舍DR5而重歸DR4，目前還不清楚其有什么新的生物學基礎。 ? ? ? ?OX40靶點 ? ? ? ?強生2016年在JBC發表文章，將Hexabody技術應用于開發OX40激動劑抗體。S267E/L328F突變可以增強FcγRIIb親和力，增強Cross-linking，但該突變同時也減弱了ADCC效應等。因而強生嘗試用Hexabody來驅動受體寡聚化，更好的激活OX40。實驗表明，E345R突變（Hexabody）可以明顯增強OX40抗體的激動劑活性。 ? ? ? ?Hexabody可以有效保留ADCC、ADCP、CDC活性。 ? ? ? ?信達生物首個OX40抗體IBI101，意外地，其激動劑活性不依賴于FcγR-dependent cross-linking效應。
? ? ? ?但要注意的是，信達生物同時開發了四價OX40抗體以更好的激活OX40。此外，三葉草生物同樣開發了OX40L三聚體蛋白SCB-340。 ? ? ? ?IgM Biosciences同樣開發了IgM亞型的OX40和GITR抗體。 ? ? ? ?CD40靶點 ? ? ? ?2017年百時美施貴寶在Cancer Cell上發表文章，證明CD40抗體的激動劑活性需要FcγRIIb依賴的Cross-linking。 
? ? ? ?余國良創立的Apexigen其核心產品即CD40抗體APX005M，被認為是最具潛力的CD40抗體。APX005M為人源化兔抗體，具有FcγR以來的Cross-linking效應。 
? ? ? ?4-1BB靶點 ? ? ? ?2020年1月，艾伯維在MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS上發表文章，發現表位和FcγRIIb依賴的Cross-linking是決定4-1BB抗體激動劑活性和降低肝毒性和關鍵因素。雖然對于肝毒性的影響似乎與其他研究不同，但對于激動劑的活性無疑是又一例證。 ? ? ? ?羅氏構建了雙抗形式的FAP/4-1BBL，其中一側為抗FAP抗體，另一側融合三聚體4-1BBL（這部分類似于天然配體形式，三葉草生物也是類似方式）。4-1BBL對4-1BB的激活依賴于靶抗原（FAP）結合引發的cluster，而不再需要FcγR-dependent cross-linking。類似原理也出現在一系列PD-L1/4-1BB雙抗中，如基石藥業引進的ND021、科望生物引進的Inbrx-105、維立志博等。 ? ? ? ?還有一種方式是中外制藥采用低親和力的4-1BB抗體構建的4-1BB/TAA共刺激雙抗，避免出現毒性。所謂共刺激雙抗，4-1BB/TAA雙抗本身抗腫瘤效應很弱，主要是作為與CD3/TAA雙抗聯用。即CD3抗體、低親和力4-1BB抗體兩重信號激活T細胞，TAA解決靶向和特異性問題。有點類似于CAR-T。 ? ? ? ?再生元也設計了類似的CD28/TAA共刺激雙抗，與CD3/TAA雙抗聯用。 ? ? ? ?賽諾菲三特異性抗體CD3/CD28/CD38與之類似，只是將兩重信號CD3、CD28整合到一個三特異性抗體分子中。 ? ? ? ?總結 ? ? ? ?Cross-linking背后是生物體內進化出的信號通路進化出的寡聚體（尤其三聚體，在TNFR受體超家族最常見）形式。隨著機制的日漸清晰，多價抗體、FcγRIIb高親和力抗體、多聚體抗體（IgM、Hexabody）、雙抗（依賴于另一個靶點結合后再激活）等技術成為從不同角度解決交聯問題的有力武器。 ? ? ? ?如涉及知識產權請與我司聯系
參考資料 Targeting the antibody checkpoints to enhance cancer immunotherapy–focus on FcγRIIB（2019）； Fc Engineering Approaches to Enhance the Agonism and Effector Functions of an Anti-OX40 Antibody（2016）； Interaction with FcgRIIB Is Critical for the Agonistic Activity of anti-CD40 antibody(2019)； Rationale for anti-CD137 cancer immunotherapy（2016）； Rationale for anti-OX40 cancer immunotherapy（2016）； The Therapeutic CD38 Monoclonal Antibody Daratumumab Induces Programmed Cell Death via Fcγ Receptor–Mediated Cross-Linking（2016）； Therapeutic activity of agonistic, human anti-CD40(2017)； Tumor-targeted 4-1BB agonists for combination with T cell bispecific antibodies as off-the-shelf therapy(2019)； Higher-Order Clustering of the Transmembrane Anchor of DR5 Drives Signaling（2019）； Exploring the TRAILs less travelled=TRAIL in cancer biology and therapy(2017)。 |
